7型腺病毒E1A基因克隆及真核表达

摘要 : 为了研究7型腺病毒(Ad7) E1A在感染中的致病机制， 分离了Ad7d2病毒株， 构建了Ad7 E1A 基因的真核表达体系。用A549细胞分离培养痰液标本中的腺病毒， 应用重叠延伸PCR扩增Ad7 E1A基因外显子， 产物克隆至真核表达载体pIRES-Neo， 构建重组子pIRES-Neo-Ad7E1A并转染A549细胞， 利用Western印迹对其表达产物进行鉴定。克隆测序显示扩增的Ad7 E1A基因外显子包含了完整的编码区基因， pIRES-Neo-Ad7E1A转染A549细胞的表达产物经Western印迹鉴定与设计相符。成功建立了Ad7 E1A 基因的真核表达体系。