IFI16基因外来表达对喉癌细胞Hep-2的影响

摘要 : 将RT-PCR扩增得到的IFI16基因构建到真核表达质粒pVR1012中， 得到pVR1012-IFI16重组质粒， 用脂质体将其转染导入Hep-2细胞。半定量RT-PCR及Western blot检测IFI16基因在Hep-2细胞中的外来表达情况， 细胞生长曲线绘制法及MTT法测定IFI16基因外来表达对Hep-2细胞增殖的影响， 流式细胞术检测IFI16基因外来表达对Hep-2细胞周期及凋亡的影响。半定量RT-PCR分析结果发现， pVR1012-IFI16重组质粒转染的Hep-2细胞IFI16基因mRNA水平显著升高; Western blot分析结果发现， pVR1012-IFI16重组质粒转染的Hep-2细胞IFI16基因蛋白质表达水平显著升高; 细胞生长曲线测定结果发现， 第2天开始pVR1012-IFI16重组质粒转染的Hep-2细胞生长变慢， 至第3天时pVR1012-IFI16重组质粒转染的Hep-2细胞生长速度明显变慢， 与mock转染及空载体转染对照细胞相比差异显著(P<0.05); MTT测定结果发现， pVR1012-IFI16重组质粒转染Hep-2细胞48 h后， 其相对活细胞数目显著降低， 与mock转染及空载体转染对照细胞相比差异十分显著(P<0.01); 流式细胞术检测结果发现， 与mock转染及空载体转染对照细胞相比， pVR1012-IFI16重组质粒转染48 h后Hep-2细胞亚G0期细胞比例以及凋亡细胞比例都显著升高。上述研究结果说明， 构建得到的pVR1012-IFI16重组质粒能在Hep-2细胞中外来表达IFI16基因， IFI16基因外来表达抑制Hep-2细胞增殖、阻滞Hep-2细胞周期在亚G0期并诱导Hep-2细胞发生凋亡。