大苞鞘石斛原球茎玻璃化超低温保存技术的研究

摘要 : 本文研究建立了大苞鞘石斛(Dendrobium wardianum Warner)原球茎玻璃化法超低温保存的技术体系。结果发现， 预处理和玻璃化溶液(plant vitrification solution 2， PVS2)装载脱水是影响大苞鞘石斛原球茎相对存活率的两个关键步骤， 高渗与低温-高渗两种预处理方法测定的相对存活率具有显著性差异; 玻璃化溶液的种类以及脱水时间对冻后存活率具有重要的影响。基于此， 建立了大苞鞘石斛原球茎的超低温保存体系， 即: 以继代培养60 d 的大苞鞘石斛原球茎为材料， 1/2MS+0.8 mol/L 蔗糖的培养基上4℃低温预处理6 d 后， 转至1/2 MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖的装载液中室温下装载40 min， 在0℃下装载PVS2 脱水40 min， 然后转入装有新鲜PVS2 冷冻管中并迅速投入液氮。在液氮保存1 h 后放在40℃水浴中快速解冻1 min， 利用含1.2 mol/L 蔗糖的1/2MS培养液洗涤3次， 每次间隔10 min; 待恢复培养30 d后统计存活率， 可使大苞鞘石斛原球茎超低温保存后存活率达到20.0%。