P- 糖蛋白线粒体转位与线粒体DNA 缺失肿瘤细胞多药耐药产生的关系

摘要 : 线粒体DNA缺失细胞(ρ0细胞)拮抗化疗药物诱导的凋亡， 但其确切机制尚不明确。本研究探讨P-gp线粒体转位与人肝癌细胞(SK-Hep1) mtDNA 缺失细胞(ρ0SK-Hep1)多药耐药产生的关系。以SK-Hep1、ρ0SK-Hep1和转线粒体细胞SK-Hep1Cyb为研究对象， CCK-8方法检测细胞对药物敏感性; Annexin V/PI 双染法及DAPI染色法检测细胞凋亡; Western blot 检测P-gp表达; 激光共聚焦显微镜结合免疫荧光检测P-gp 细胞内分布。结果显示， SK-Hep1、ρ0SK-Hep1 和 SK-Hep1Cyb 细胞对多柔比星(DOX)的IC50 分别为0.62±0.02 μg/ml、4.93±0.17 μg/ml 和0.57±0.02 μg/ml。SK-Hep1、ρ0SK-Hep1和SK-Hep1Cyb细胞凋亡率分别为11.25%±1.36%、4.75%±0.98%和14.50%±1.57%， ρ0SKHep1对细胞凋亡有明显抗性。Western blot 检测发现ρ0 细胞内P-gp、Bax、Bcl-2 表达增加， Bcl-2/Bax 比值增加。免疫荧光共定位显示， ρ0 细胞线粒体内P-gp 表达增加。结果表明， ρ0 细胞对化疗药物诱导的凋亡有明显抵抗， 这种现象可能与ρ0 细胞P-gp、Bax、Bcl-2 表达增加有关。ρ0 细胞P-gp线粒体转位可发挥外排泵作用将药物排出线粒体， 改变化疗药物的亚细胞分布， 减少细胞内药物浓度， 使细胞产生多药耐药。