RNAi 抑制Smad4 基因表达对猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响

摘要 : Smad蛋白家族是TGF-β/Smad信号通路中的重要成员， 其中Smad4在该信号转导途径中起着关键作用。本研究利用RNAi技术沉默Smad4基因， 探讨其对猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响。设计并合成靶向Smad4的小分子干扰RNA， 在脂质体的介导下转染猪卵巢颗粒细胞， 荧光定量PCR检测Smad4 mRNA的表达情况; MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法分析检测细胞活性; TUNEL(原位末端核苷酸标记法)及Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况; 荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax的mRNA 表达水平。研究显示， Smad4-siRNA 能有效抑制Smad4 的mRNA 表达(P<0.01)， 细胞活性由0.31 减少到0.27， 凋亡率由17.0% 增加到22.1%， Bcl-2 的mRNA 表达显著下调。结果说明沉默Smad4 基因可以促进猪卵巢颗粒细胞的凋亡， 其机制可能与调控Bcl-2 表达有关。