人巨细胞病毒潜伏相关IL-10 基因克隆及体外表达

郑晓群¹ 冯晶晶² 曾智² 姜招嫦² 季敬璋² 李祥² 吕建新^2*

¹ 温州医学院附属第二医院实验诊断中心, 温州 325027；² 温州医学院，浙江省医学遗传学重点实验室, 温州 325035

摘要 : 为了研究人巨细胞病毒潜伏相关白细胞介素-10(LA-cmvIL-10)及巨细胞病毒编码的白细胞介素-10(cmvIL-10)在病毒感染中的作用，构建了cmvIL-10 基因和LA-cmvIL-10 基因的原核及真核表达体系。从患儿尿液标本中提取病毒DNA，应用重叠延伸PCR扩增cmvIL-10 基因和LAcmvIL-10 基因外显子，产物克隆至原核表达载体pMal-c2x 和真核表达载体pCDNA3.1 上，测序显示扩增的cmvIL-10 基因和LA-cmvIL-10 基因外显子包含了完整的编码区; 重组的原核表达质粒pMal-c2x-cmvIL-10 和pMal-c2x-LAcmvIL-10 转化受体菌E.coli BL21(DE3)，经异丙基-β-D- 硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，在受体菌内表达目的蛋白。将表达产物免疫家兔，获得特异性抗血清。真核表达载体pCDNA3.1-cmvIL-10 和pCDNA3.1-LAcmvIL-10 转染Hela 细胞，经Western blot 鉴定与设计相符。