MyD88siRNA 诱导猪调节性树突状细胞的实验研究

摘要 : 采用siRNA 干扰猪外周血单核细胞来源DC(monocyte-derived DC， MoDC)髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88， MyD88)基因的表达， 检测干扰前后的细胞表型， 免疫学功能及生物学活性， 探讨猪调节性DC 诱导耐受的机制。提取猪外周血单核细胞(peripheral bloodmonocyte， PBMC)， 经GM-CSF 和IL-4 诱导， 体外培养得到未成熟MoDC。通过化学合成法制备针对MyD88 基因siRNA 2 对， 在LipofectamineTM RNAiMax 转染试剂介导下转染MoDC， Westernblot 法及Real-time PCR检测干扰前后MyD88 基因的表达水平。培养至第五天将DC分为四组: 对照组、LPS 组、干扰1 组和干扰2 组， 继续培养3 天。siRNA干扰后， MyD88 mRNA和蛋白质表达水平下降>80%; MyD88siRNA序列1 和序列2 干扰后MoDC CD80/86、SLA- Ⅱ表达降低， MLR显示刺激指数下降， IFN-γ 降低， IL-4 增高， 与LPS 组差异均具有统计学意义(P<0.05)。脂质体介导siRNA 技术能干扰猪MoDC 的MyD88 基因， 阻断TLR 信号传导途径， 抑制DC 成熟， 获得耐受性DC， 表现为对同种异体T 细胞的刺激能力降低， 诱导免疫反应向Th2 偏移。