Anti-LMP1scFv/tP 融合蛋白基因递送载体在大肠杆菌中的表达与纯化

摘要 : 潜伏膜蛋白1(LMP1) 是一种EB病毒编码的膜蛋白，组成型表达于各种肿瘤细胞表面。通过体外基因拼装技术，构建抗LMP1单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因(anti-LMP1scFv/tP)。在抗LMP1 单链抗体基因的3’ 末端连接上编码鱼精蛋白截短体的基因序列，设计anti-LMP1scFv/tP 融合蛋白基因。采用PCR 为基础的基因拼接获得anti-LMP1scFv/tP。在大肠杆菌Rosseta中诱导表达anti-LMP1scFv/tP融合蛋白并利用其His标签在变性条件下通过Ni2+亲合层析介质进行纯化，纯化产物通过尿素浓度梯度透析的方法进行复性。间接免疫荧光染色检测anti-LMP1scFv/tP融合蛋白的抗原结合活性，DNA凝胶迁移阻滞实验检测anti-LMP1scFv/tP的DNA结合活性，结果显示anti-LMP1scFv/tP 融合蛋白能够与LMP1 阳性表达的CNE1-GL细胞结合，而不能与LMP1 阴性表达的CNE1 细胞结合；同时复性anti-LMP1scFv/tP 融合蛋白也具有与DNA结合的活性。本研究为该单链抗体用于靶向输送外源核苷酸的研究奠定了基础。