缺血心脏成纤维细胞构建工程化心肌样组织的研究

摘要 : 采用5 μmol/L 5- 氮胞苷(5-azacytidine， 5-aza)诱导Wistar 大鼠缺血心脏成纤维细胞(fibroblasts of ischemia myocardium， FIMs)分化为心肌样细胞， 利用抗心肌特异性肌钙蛋白(cardiacTroponin T， C-TnT)和抗α- 横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin， α-SA)间接免疫荧光标记， 透射电镜以及Real-time PCR 检测血管紧张素原(angiotensinogen， AGT)和脑钠肽(brain natriuretic peptide，BNP)mRNA含量， 鉴定诱导分化的心肌样细胞。采用扫描电镜鉴定两种不同支架组织(脱细胞大肠肌膜和脱细胞胶原膜)， 将心肌样细胞分别接种于两种支架组织上生长5~7 天， 利用抗C-TnT， α-SA间接免疫荧光和扫描电镜， 观察工程化心肌样组织生长情况。结果发现， 诱导分化的心肌样细胞胞质内含有丰富的肌微丝， 对抗C-TnT 和α-SA 间接免疫荧光标记反应阳性， Real-time PCR 检测显示心肌样细胞内AGT 和BNP mRNA 表达明显高于对照组FIMs， 差别有显著性(P<0.05)。在两种不同支架组织上生长， 心肌样细胞呈多边形有突起或柱状分支状片状平铺排列， 对抗C-TnT和α-SA反应阳性， 细胞胞浆内可见肌微丝。研究表明， FIMs 能诱导分化为心肌样细胞， 在不同支架组织上生长， 构建工程化心肌样组织。