实时荧光定量PCR 方法检测小RNA

摘要 : Real-time Quantitative PCR Detecting System， 即实时定量核酸扩增检测系统， 也称为实时定量基因扩增检测系统， 简称定量PCR (qPCR)。荧光定量PCR 一般分为非特异性荧光定量PCR 和特异性荧光定量PCR。本文主要介绍一种应用非特异性荧光定量PCR (以 SYBR Green I为例)方法对小RNA进行定量分析。SYBRGreen I qPCR 分析小RNA 的优点为: 实验设计简单， 一般需要一条特异性反转录引物， 一条特异性正向PCR引物， 反向PCR引物可通用于所有小RNA分析， 无需象TaqMan方法那样专门设计探针; 实验成本相对较低;可通过溶解曲线分析来检测扩增反应的特异性。这些特点有利于初学者掌握该技术， 而对于一般的分析也可以完全达到实验目的。