miR-191-5p靶向C/EBPβ抑制C2C12细胞脂质沉积
连欣荣1,2 陈海敏1 王佳瑞2 夏静雯2 张瑾2,3* 毋文静2*
(1浙江理工大学生命科学与医药学院, 杭州 310018; 2嘉兴大学生物与化学工程学院, 嘉兴 314001; 3嘉兴爱博生物科技有限公司, 嘉兴 314006)
摘要 :
该研究旨在探究miR-191-5p对C2C12细胞成肌分化和肌管内异位成脂的作用及其机 理。以小鼠成肌细胞系C2C12为材料, 使用马血清以及油酸钠和棕榈酸钠诱导细胞成肌或肌内成脂; 转染miR-191-5p mimic或inhibitor后, 采用qRT-PCR和Western blot检测成肌标志基因(MyoD、MyoG、 MyHC、Myf5)和成脂标志基因(FAS、PPARγ、HSL)的表达以及相关信号通路的活性; 最后, 利用生 物信息学分析和双荧光素酶报告系统对miR-191-5p靶基因进行预测和验证。结果发现, miR-191-5p 于小鼠骨骼肌中高表达, 在C2C12细胞成肌分化过程中表达水平先升后降, 推测其参与调控骨骼肌 发育; 与对照组相比, 过表达miR-191-5p促C2C12细胞成肌分化, 显著提高MyoD、MyoG等基因的表 达量; 在异位成脂方面, 过表达miR-191-5p可显著抑制细胞内脂滴的沉积, 下调FAS、PPARγ等基因表 达, 同时ERK1/2的磷酸化水平也显著下降; 另外, 共转染psi-CHECK-2-C/EBPβ 3ʹUTR与miR-191-5p mimic会明显降低海肾与萤火虫荧光强度比值, 提示miR-191-5p可直接作用于C/EBPβ的3ʹUTR。综 上所述, miR-191-5p可能是通过靶向C/EBPβ, 提升ERK1/2信号通路的活性, 促进C2C12细胞成肌和 抑制异位脂质沉积。
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