Circ_0007444通过miR-6838-5p/CEP55轴促进MDA-MB-231和MCF-7细胞的增殖和迁移
叶雨 张佳雯 诸健琴 华晶雯 孙晓春*
该研究旨在阐明circ_0007444调控乳腺癌进展的分子机制, 为乳腺癌的临床诊断、治疗和预后提供新的方向。通过生物信息学分析筛选出乳腺癌组织中差异表达的circRNAs。利用Sanger测序、RNase R实验和琼脂糖凝胶电泳法验证circ_00074444的环形结构。通过实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR)检测乳腺癌组织及其匹配的邻近正常组织、正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞系(MDA-MB-231和MCF-7)中circ_0007444的表达水平。通过RNA FISH实验对MDA-MB-231和MCF-7细胞中circ_0007444进行定位。采用平板克隆形成实验及Transwell实验评估转染si-circ_0007444后对细胞增殖和迁移能力的影响。通过Starbase、CircBank和Circular RNA Interactome三个公共数据库预测筛选circ_0007444所靶向的miRNAs。利用双荧光素酶报告系统验证circ_00074444与miR-6838-5p的靶向互作关系, 并通过平板克隆形成实验及Transwell实验探究si-circ_0007444和miR-6838-5p inhibitor共转染对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。通过数据库(Starbase、miRWalk、miRTarBase、GEPIA)预测miR-6838-5p调控的下游靶基因并取交集。RT-qPCR、蛋白质印迹法检测下游靶蛋白中心体蛋白55(centrosomal protein 55, CEP55)在MCF-10A、MDA-MB-231和MCF-7中的表达水平。通过RT-qPCR和蛋白质印迹法验证敲低和过表达miR-6838-5p后CEP55的mRNA和蛋白质表达水平。通过平板克隆形成实验及Transwell实验探究OE-CEP55和si-circ_0007444共转染对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。结果表明circ_0007444在乳腺癌细胞中显著高表达(P<0.001)。细胞功能实验证实敲低circ_0007444可抑制细胞增殖活性和迁移能力。机制研究表明circ_0007444通过海绵化miR-6838-5p上调CEP55, 进而促进乳腺癌进展。总之, 该研究首次阐明circ_0007444/miR-6838-5p/CEP55调控轴在乳腺癌进展中的作用模式, 为开发基于环状RNA的分子靶向治疗提供了实验依据。
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