CircHdgfrp3靶向miR-3089-3p/miR-760-5p抑制脂肪细胞分化
杨思晨1,2 吴佳轩2 施绮雯1 张瑾2,3* 毋文静2*
(1浙江工业大学药学院, 杭州 310014; 2嘉兴大学生物与化学工程学院, 嘉兴 314001; 3嘉兴爱博生物科技有限公司, 嘉兴 314001)
摘要 :
该研究旨在明确环状RNA分子circHdgfrp3对脂肪细胞成脂分化的作用及其机制。通 过RNA-Seq筛选出在大白猪肌内脂肪组织中表达水平显著高于皮下脂肪组织的环状RNA分子 circHdgfl3, 其在猪和小鼠中的相似性高达93.87%。以小鼠前脂肪细胞系3T3-L1为材料, 通过RNase R消化法、核质定位法和qPCR法对circHdgfrp3进行鉴定、定位以及表达量分析, 结果显示, circH dgfrp3以稳定环状结构存在于细胞质中, 其表达水平在3T3-L1细胞分化过程中呈先升后降趋势; 通 过转染si-circHdgfrp3或pcDNA3.1-circHdgfrp3改变其在3T3-L1细胞分化过程中表达水平; 利用油 红O染色和Western blot等技术, 发现circHdgfrp3可显著抑制胞内脂滴积累(P<0.05)和成脂标志基 因PPARγ、C/EBPα、LPL的表达(P<0.05); 最后利用荧光素酶报告分析等技术, 确定circHdgfrp3与 miR-3089-3p、miR-760-5p存在靶向结合关系, 并且可以显著减弱AKT的磷酸化。综上所述, circH dgfrp3可能通过靶向miR-3089-3p和miR-760-5p下调AKT-mTOR活性进而抑制脂肪细胞的成脂分化。
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