大鼠精原干细胞的高效分离和纯化方法
张 岩 罗奋华 刘林洪 萨初拉 于泊洋 吴应积*
内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室, 呼和浩特 010021
摘要 : 精原干细胞是精子发生的基础， 是永久分化成精子的克隆源， 它既可以自我更新维持体内干细胞的数量， 又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟精子。本文以22~25日龄Wistar-Iamichi大鼠为研究对象， 利用两步酶消化法分离得到睾丸曲细精管细胞悬液， 根据精原干细胞与曲细精管细胞悬液中体细胞(支持细胞及少量的管周细胞)及各级分化的生精细胞贴壁能力及对细胞外基质粘附力的不同， 将大鼠精原干细胞进行纯化。经纯化后， 5只大鼠的睾丸可以得到约3×105个精原干细胞， 该精原干细胞在体外培养可形成克隆， 并且该克隆可表达精原干细胞特异的标记基因GFRα1和CDH1。本文所介绍的高效分离和纯化大鼠精原干细胞的方法， 操作简便， 且得到的精原干细胞具有很高的活力和增殖能力， 该方法为今后大鼠精原干细胞的长期培养及操作研究奠定了基础。
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