第29卷 第1期（2007年2月）： 86-90

人PAK1重组蛋白质的表达及在人胃癌BGC-823细胞内定位

王桂玲　周　颖　赵大林¹　李家滨　刘芙蓉　李　丰*

(中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室, 沈阳 110001; ¹沈阳体育学院生理学教研室, 沈阳110001)

摘要　　为检测人PAK1在原核细胞中的表达情况及在真核细胞中的定位, 利用RT-PCR技术获得PAK1目的基因, 构建GST融合蛋白原核表达载体pGEX-5X-1/PAK1, IPTG诱导后进行SDS-PAGE及Western 印迹检测, 并用体外激酶实验测定其生物学活性; 同时, 构建带绿色荧光蛋白(GFP)标签的真核表达载体pEGFP/PAK1, 利用脂质体法转入人胃癌BGC-823细胞系中, 在共焦激光扫描显微镜下观察癌细胞中绿色荧光蛋白的表达。结果表明, pGEX-5X-1/PAK1载体能在大肠杆菌BL-21中正确表达GST-PAK1融合蛋白, 大小约为94 kDa, 具有生物活性; PAK1绿色荧光蛋白定位于细胞浆。上述研究为进一步探索PAK1的生物学特性及信号转导通路打下了基础。

关键词　　PAK1; 基因克隆; 蛋白表达; 转染; 绿色荧光蛋白

收稿日期: 2006-03-30　　接受日期: 2006-10-25

国家自然科学基金(No.30370736, No.30570966)和教育部博士点基金(No.20050159023)资助项目

*通讯作者。Tel: 024-23261056, Fax: 024-23261056, E-mail: fli@mail.cmu.edu.cn