第29卷 第5期（2007年10月）： 771-776

一种新的B链C端去四肽胰岛素的研制方法

王一成　石嘉豪¹　张元兴　费　俭^1*

(华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室, 上海200237; ¹同济大学生命科学与技术学院, 上海200092)

摘要　　报道了将单体胰岛素前体(MIP)经胰蛋白酶和羧肽酶B两步连续酶切获得B链C端去四肽胰岛素(DTI)的方法。MIP由甲醇酵母表达,最高发酵表达量达到150 mg/L。发酵液中MIP通过疏水层析, 分子筛初步纯化后直接进行酶切, 在胰蛋白酶酶切3 h后加入抑制剂p-aminobenzamidine 处理15 min, 然后直接加入羧肽酶B酶切6 h, 再通过反相柱纯化即可得到纯品DTI, 从分子筛到最后DTI, 总纯化得率达到77%。按中国药典小白鼠惊厥法测定得DTI的生物活力为22IU/mg, 是胰岛素的80%, 在Superdex G-75分子筛上测定DTI的解离聚合曲线, 证明其是单体。

关键词　　单体胰岛素前体; B链C端去四肽胰岛素; 胰蛋白酶; 羧肽酶B

收稿日期: 2007-04-20　　接受日期: 2007-06-07
上海市科学技术委员会基金项目资助(No.04DZ19204)
*通讯作者。Tel/Fax: 021-65982429, E-mail: jfei124@126.com