第29卷 第2期（2007年4月）： 272-276

不同连接肽的双价单链抗体基因的构建及表达

严丹丹^1,2　方　瑾^1*　宋今丹¹

(中国医科大学细胞生物学教研室, 卫生部细胞生物学重点实验室, 沈阳110001; ²沈阳医学院免疫教研室, 沈阳110034)

摘要　　采用基因重组技术分别借助不同长度的连接肽[G₄S和(G₄S)₃], 将两个相同的抗人大肠癌单链抗体基因ND-1scFv共价连接, 构建表达载体pET-28a(+)ND-1sc(Fv)₂, 并在大肠杆菌BL21中表达ND-1sc(Fv)₂的融合蛋白。应用Ni²⁺亲和层析方法对表达产物进行纯化, SDS-PAGE、免疫荧光法（IFA）和ELISA对纯化后的蛋白质进行纯度和免疫活性分析。结果表明成功构建了表达载体pET-28a(+)ND-1sc(Fv)₂, 并在大肠杆菌中获得高效表达, 其表达产物以不溶性包涵体形式存在。纯化后ND-1sc(Fv)₂-5、ND-1sc(Fv)₂-15的蛋白质纯度分别为90%和86%。IFA及ELISA结果表明, 二者均保留了亲本抗体的免疫活性, 对表达在人大肠癌细胞上的肿瘤相关抗原LEA具有特异结合活性, 其免疫活性均明显高于ND-1scFv, 其中ND-1sc(Fv)₂-15的免疫活性更接近于亲本单抗ND-1, 该抗体有望成为大肠癌临床导向诊断和治疗的理想载体。

关键词　　双价单链抗体; ND-1; 连接肽; 大肠癌; 表达

收稿日期: 2006-06-28　　接受日期: 2006-11-15

国家自然科学基金(No.85-722-18-02, No.20375047)和辽宁省教育厅科学研究项目(No.202013135)资助项目

*通讯作者。Tel: 024-23256666-5347, E-mail: Jfang61@netease.com