下调TSG101基因对人急性髓性白血病细胞的调节作用

刘丽华*　张宏卫¹　弭忠祥 ²
(绍兴文理学院医学院分子诊断实验室，绍兴 312000；
¹绍兴文理学院医学院附属医院神经科，绍兴312000；
²绍兴文理学院生命科学院，绍兴312000 )

[摘要]　　构建肿瘤易感基因101(TSG101)基因的小干扰RNA载体并将其转导入HL-60细胞， 获得稳定转染的阳性克隆后，应用RT-PCR和Western印迹进行鉴定；MTT法和流式细胞仪检测 细胞转染前后生长速度和细胞周期的变化；DNA梯带(ladder)法和流式细胞仪检测细胞对顺铂诱导 的凋亡的变化；Western印迹检测耐药相关蛋白P-gp和 MRP的表达变化。结果表明，成功构建了TSG101的小干扰RNA载体；经蛋白质水平检测证实成功建立了稳定的TSG101低表达的白血 病细胞模型；转染TSG101小干扰RNA后的细胞生长速度显著减慢，出现G ₁期阻滞；对顺铂的敏感性明显增强，形成DNA条带，且低表达P-gp。因此，下调TSG101基因能抑制HL-60细胞生长， 增加细胞对化疗药物的敏感性，并提示该基因具有进行白血病基因治疗的可行性。

[关键词]　　白血病；TSG101；RNA干扰

收稿日期：2005-11-21　　
接受日期：2006-04-19
浙江省自然科学基金资助项目(No.302301)
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