第29卷 第4期(2007年8月):585-589

 

4个品系小鼠胚胎干细胞系的建立

 

蒋永华 孙筱放* 郑育红 张文红 银益飞 廖宝平

 

(广州医学院第三附属医院, 广州市生殖与遗传重点实验室, 广州 510150)

 

摘要  探索高效的不同品系的小鼠胚胎干细胞的建系方法。B6D2F1 (C57BL/6×DBA/2)、 129/SV×DBA/2、C57BL/6、BALB/C等4个不同品系小鼠, 孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotrophin, PMSG)+人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin, HCG)促排, 3.5天交配后(days post coitus, dpc)冲洗子宫取囊胚, 或者2.5 dpc冲洗输卵管, 卵裂球体外培养获取囊胚。囊胚种植到小鼠成纤维细胞饲养层上干细胞培养液培养, 4~5天内细胞团扩增后玻璃毛细管挑出, 种植到新的饲养层上过夜再行胰蛋白酶消化, 3~4天传代一次。对所建立的小鼠ES细胞系进行形态学、染色体核型、AKP染色、体内外分化能力, 干细胞分子标记物荧光免疫染色等鉴定。获得10株小鼠胚胎干细胞,具有典型的胚胎干细胞生长特性,符合ES细胞的鉴定标准。结果表明成功的建立了来自B6D2F1(C57BL/6×DBA/2)、 129/SV×DBA/2、C57BL/6、BALB/C等4个不同品系小鼠的10株ES细胞系。内细胞团挑出过夜增殖后消化的培养方法可能有助于提高ES细胞的建系率。

 

关键词  小鼠品系; 胚胎干细胞系; 内细胞团; 体外培养

 
收稿日期: 2006-11-22  接受日期: 2007-3-14
广东省科技厅重大攻关课题(No.B30202), 广州市科技局科技攻关计划重大项目(No.200621-E0021)资助
 

*通讯作者。Tel: 020-81292202, Fax: 020-81292013, E-mail: xiaofangsun@hotmail.com

 
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