第29卷 第4期(2007年8月):535-538

 

肺炎克雷伯菌耐氨基糖苷类抗生素基因 aac(3)-I的改构与功能

 

查长森 王 震 吕建新* 陈云波 邹立林 季敬璋 彭 颖 明镇寰

 

(温州医学院细胞与分子医学研究所,浙江省医学遗传学重点实验室,温州 325035)

 

摘要  研究氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(3)-I碱基变异与功能的关系。构建表达载体pET28a-aac(3)-I, 转化感受态细胞E.coli BL21(DE3), 筛选到阳性克隆送测序。然后在体外对aac(3)-I基因进行易错PCR改造, 筛选到一株阳性克隆测序后发现7处碱基变异, 其中C272T、T373C引发了氨基酸的变异, 分别对应: Ser91Phe、Tyr125His。以琼脂稀释法检测不同克隆的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)。实验结果表明变异株MIC较突变前下降64倍(庆大霉素)、4倍(阿米卡星)、8倍(依替米星)。为进一步了解和阐明耐药酶AAC(3)-I与底物的作用机制打下基础。

 

关键词  aac(3)-I; 易错PCR; 最低抑菌浓度

 
收稿日期: 2006-11-23  接受日期: 2007-2-13
浙江省科技厅重点项目(No.2004C23018)
 

*通讯作者。Tel: 0577-86689805, Fax: 0577-86689776, E-mai1: ljx@wzmc.net

 
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