第39卷 第3期(2017年3月):280-287 DOI:10.11844/cjcb.2017.03.0283

 

II型肺泡上皮细胞Brg1基因条件敲低小鼠的基因型鉴定

 

司道祝1 彭单伊1 张 荣3 夏耘秋2 牛 超2 苟 好1 刘 姜1 王莉佳1 田代印2 刘恩梅2 邹 琳1 符 州1*

 

(1重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室,儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地, 重庆市干细胞治疗工程技术研究中心, 重庆 400014;
2重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心, 重庆 400014;
3第四军医大学附属第一医院西京医院, 西安 710000)

 

摘要  该文旨在鉴定特异敲低II型肺泡上皮细胞中Brg1(Brahma-related gene 1)基因小鼠的基因型, 为进一步研究Brg1在肺相关疾病中的作用奠定基础。将两对转基因小鼠Brg1fl/fl和SP-C-rtTA/(tetO)7-Cre进行繁殖交配, 将得到纯合子、杂合子及野生型3种基因型。出生后1周龄剪尾提取基因组DNA, PCR法判定基因型。用多西环素诱导法诱导(tetO)7-Cre重组酶活性, 靶向剪切II型肺泡上皮细胞上Brg1基因, 磁珠分选法提取小鼠原代II型肺泡上皮细胞, 通过观察细胞生长特征、检测proSP-C表达鉴定原代II型肺泡上皮细胞, RT-PCR法、Western blot检测Brg1表达水平。结果显示,成功繁殖了Brg1纯合子小鼠, 通过磁珠分选法成功分离了原代II型肺泡上皮细胞, 用多西环素诱导法成功敲低了II型肺泡上皮细胞Brg1基因。该结果为相关研究提供动物模型奠定了基础。

 

关键词  Brg1; II型肺泡上皮细胞; 基因敲低; 基因型

 
收稿日期: 2016-9-19  接受日期: 2017-1-9
重庆市科技委员会重大专项(批准号: Cstc2014yykfC10003)资助的课题
 

*通讯作者。Tel: 023-63622934, Fax: 023-63622934, E-mail: fu_ zhou79@aliyun.com

 
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