第38卷 第7期(2016年7月):836-842 DOI:DOI: 10.11844/cjcb.2016.07.0096

 

山羊精原干细胞的鉴定及培养体系优化的研究

 

张钦恺1 姜 颖1 王明明1 董焕声1 尉玉杰2 潘庆杰1*

 

(1青岛农业大学动物生殖发育与基因工程研究所, 青岛 266109;
2山东省莱阳市畜牧兽医局, 烟台 265200)

 

摘要  该研究优化了山羊精原干细胞(goat spermatogonial stem cells, gSSCs)培养体系, 使山羊精原干细胞能在体外长期培养, 维持自我更新的能力并保持未分化状态。取3~5月龄山羊睾丸,采用两步酶消法结合差速贴壁方法得到山羊精原干细胞悬液, 分别通过形态学观察、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AKP)染色、特异基因表达及蛋白质水平的分析对培养的细胞进行鉴定; 并以山羊睾丸支持细胞(goat sertoli cells, gSCs)、小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)和层黏连蛋白(laminin, L)为饲养层, 观察饲养层对山羊精原干细胞体外增殖的影响。结果表明, 山羊精原干细胞体外增殖形成克隆簇, AKP染色呈阳性。经RT-PCR检测, Oct-4、C-myc、CyclinD1、Ngn3和TERT等干细胞特异基因均有表达。细胞免疫组化结果显示, Oct-4、SSEA-1、α6-integrin、Vasa和Thy-1蛋白质呈阳性。克隆簇统计显示, 在山羊睾丸支持细胞上形成的山羊精原干细胞(goat spermatogonial stem cells, gSSCs)克隆数与其他两组比较差异显著(P<0.05)。山羊睾丸支持细胞饲养层上的精原干细胞可在体外传3~4代, 培养时间为2个月。结果证明, 通过两步酶消法和差速贴壁法可以分离获得山羊精原干细胞, 且山羊睾丸支持细胞能够促进gSSCs的增殖。

 

关键词  山羊; 精原干细胞; 睾丸支持细胞; 饲养层

 
收稿日期: 2016-3-17  接受日期: 2016-5-20
国家转基因新品种培育重大专项(批准号: 2011zx08008-003)和山东省现代农业产业技术体系羊产业创新团队项目(批准号: 621231)资助的课题
 

*通讯作者。Tel: 0532-86080759, E-mail: qjpan@126.com

 
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