第38卷 第4期(2016年4月):356-362 DOI:10.11844/cjcb.2016.04.0406

 

基于FRET技术MMP-9生物传感器的构建及鉴定

 

王 琰1 饶 烽1 崔钢华1 刘 伟2 曹薇薇2 史晨辉1,2 王维山1,2*

 

(1石河子大学医学院第一附属医院骨科, 石河子 832000; 2新疆民族与地方病教育部重点实验室, 石河子 832000)

 

摘要  为了构建包含有增强青色荧光蛋白-MMP-9-黄色荧光蛋白(ECFP-MMP-9-YPet)融合蛋白的真核表达质粒MMP-9生物传感器, 利用原有质粒Src biosensor和通用载体pMD-18T, 通过基因工程的方法构建ECFP-MMP-9-YPet生物传感器并进行鉴定, 转染293T细胞24 h后观察转染效率,然后加MMP-3刺激293T细胞, 运用荧光共振能量转移(flurorescence resonance energy transfer, FRET)技术在荧光显微镜下观察MMP-9生物传感器的荧光共振能量转移现象。PCR和双酶切鉴定显示,ECFP-MMP-9-YPet生物传感器构建成功, 293T细胞转染效率约40%。用免疫荧光法检测MMP-9生物传感器融合蛋白在293T细胞表面膜表达, 用MMP-3刺激转染细胞可以检测到FRET现象。结果表明, 基于FRET构建的MMP-9生物传感器可以敏感而准确地监测活细胞中MMP-9的表达情况。

 

关键词  荧光共振能量转移; MMP-9; 生物传感器; 构建; 骨关节炎

 
收稿日期: 2015-12-28  接受日期: 2016-3-1
国家自然科学基金(批准号: 81160225、81260453、81360451)、新疆兵团医药卫生专项资助(批准号: 2013BA020)、兵团国际交流与合作专项(批准号:2012BC002、2011BC004)和兵团科技创新团队专项基金(批准号: 2014CC002)资助的课题
 

*通讯作者。Tel: 13399931115, E-mail: wwsmc2002@sina.com

 
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