第37卷 第1期(2015年1月):39-46 DOI:10.11844/cjcb.2015.01.0334

 

Egr-1对APP基因表达的调控作用

 

马 琳1# 周 瑜2# 李永玲2 柴 娟1 贾中发2 郭 克2 孙 涛1 崔建奇1*

 

(1宁夏颅脑疾病重点实验室, 省部共建国家重点实验室培育基地, 银川 750004; 2宁夏医科大学基础医学院, 银川 750004)

 

摘要  该研究构建了含有APP启动子的荧光素酶报告质粒以及缺失突变的报告质粒, 将该质粒与Egr-1真核表达载体pCDNA3-Egr-1共转染到HEK293与U87MG细胞中进行荧光素酶活性测定, 以确定Egr-1对APP基因表达的调控作用。通过染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)和凝胶电泳迁移实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)确定Egr-1蛋白在APP启动子上的结合部位, 同时利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA(trichostatin A)和butyrate诱导内源性Egr-1的表达以及Egr-1抑制剂suramin来作用于细胞, 通过蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测Egr-1对APP蛋白表达的作用。结果显示, Egr-1蛋白在APP基因启动子上5′UTR区域有特异性的结合部位, 去除该结合部位则Egr-1失去对APP基因启动子的调控作用, ChIP和EMSA的结果也证实了该结合位点; 通过HDAC抑制剂和suramin干扰内源性Egr-1的表达则显著影响了Egr-1对APP基因表达的调控作用。

 

关键词  Egr-1; 淀粉样前体蛋白; 阿尔茨海默病; 基因表达调控

 
收稿日期: 2014-11-6  接受日期: 2014-11-26
国家重点基础研究发展计划(973计划)(批准号: 2012CB722408)和国家自然科学基金(批准号: 81260197)资助的课题
#共同第一作者
 

*通讯作者。Tel: 0951-6880697, E-mail: jiani@gmail.com

 
您是第 位访问者,欢迎!
主 办:中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国细胞生物学学会
协办: 上海国联干细胞技术有限公司 上海赛傲生物技术有限公司
地 址:上海徐汇区岳阳路319号31号楼A楼303室 邮编:200031 电话:021-54920950 / 2892 / 2895 Email:cjcb@sibs.ac.cn
沪ICP备05017545号