第36卷 第12期(2014年12月):1644-1648 DOI:10.11844/cjcb.2014.12.0270

 

运用改良的CRISPR/Cas9系统建立HtrA2敲除细胞株

 

胡 袁 张 婷 姜长安*

 

(四川大学生物治疗国家重点实验室/生物治疗协同创新中心, 成都 610041)

 

摘要  能识别特定基因组DNA序列的核酸酶是基因编辑的重要工具。在单链RNA引导下,来源于一种产脓链球菌的成簇规律间隔短回文重复(clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)关联蛋白(CRISPR-associated protein 9, Cas9)能够发挥其核酸酶功能对基因组特定序列进行剪切。这种功能依赖于单链引导RNA(single-guide RNAs, sgRNAs或gRNAs)中20 nt的核心靶向序列。在该研究中, 作者对已有的CRISPR/Cas9系统载体进行了优化, 简化了gRNA表达载体的构建。运用优化后的CRISPR/Cas9系统, 我们敲除了HEK293T细胞中HtrA2基因的第一个外显子。这一改进大幅度降低了CRISPR/Cas9技术的使用成本。

 

关键词  CRISPR/Cas9; HtrA2; 基因敲除

 
收稿日期: 2014-8-21  接受日期: 2014-10-9
国家自然科学基金(批准号: 31171333)资助的课题
 

*通讯作者。Tel: 028-85503905, E-mail: cjcareer@qq.com

 
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