第36卷 第5期(2014年5月):671-678 DOI:10.11844/cjcb.2014.05.0318

 

大鼠精原干细胞的微滴培养法

 

霍 龙1 罗奋华2 张 岩1,3 全祺玮1 吴应积1,2*

 

(1内蒙古大学生命科学学院, 呼和浩特 010021; 2内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室, 呼和浩特 010021; 3内蒙古医科大学基础医学院, 呼和浩特 010010)

 

摘要  精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)作为成体干细胞的一类, 既具有自我更新和分化的潜能, 又可向子代传递遗传信息。阐明其增殖过程及分化特性对SSCs的进一步应用具有重要意义。小鼠SSCs的微滴培养研究显示, 微滴培养技术与常规培养方法相比具有独特的优势。然而其他物种的SSCs能否实现微滴培养尚有待证实。该研究旨在利用微滴培养法建立大鼠SSCs体外培养技术。5、8、10、20、40个大鼠SSCs分别置于20 μL微滴中培养, 用丝裂霉素处理的STO细胞作为滋养层。倒置显微镜观察记录大鼠SSCs的增殖状态。一个月后, 对微滴培养的SSCs进行免疫荧光双标记染色鉴定。结果显示, 一个微滴内接种5个SSCs就能实现扩增培养; 培养一个月后,SSC仍然表达其特异的标记基因分子如CDH1、OCT4、PLZF、Thy1和Gfra1。体外诱导分析显示,微滴培养的大鼠SSCs具有分化为精母细胞的能力。大鼠SSCs微滴培养法的建立, 为其他物种SSCs的培养提供了借鉴, 也为再生医学和生命科学相关领域的研究提供了技术平台。

 

关键词  精原干细胞; 微滴培养技术; 免疫荧光染色; 体外分化

 
收稿日期: 2013-9-29  接受日期: 2014-1-24
国家大学生创新性实验计划(批准号: 101012610)和高等学校博士学科点专项科研基金博导类项目(批准号: 20101501110001)资助的课题
 

*通讯作者。Tel: 0471-4992443, E-mail: wuyj1211@163.com

 
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