第36卷 第3期(2014年3月):331-337 DOI:10.11844/cjcb.2014.03.0340

 

NLS-RARα蛋白在重组腺病毒Ad-NE感染的NB4中定位的验证

 

王 慧1,2 钟 梁2 蒋开玲2 朱新瑜2 马鹏鹏2 阳小群2 刘北忠1,2*

 

(1重庆医科大学附属永川医院中心实验室, 重庆 402160; 2重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室, 重庆 400016))

 

摘要  该实验主要验证重组腺病毒Ad-NE感染NB4细胞后, NLS-RARα蛋白的表达及其定位。用重组腺病毒Ad-NE感染NB4细胞, 检测感染效率, 分别用RT-PCR和Western blot法在mRNA水平和蛋白水平验证转染成功; 提取转染成功的NB4细胞的核蛋白, Western blot法检测细胞核中NLS-RARα蛋白的表达; FITC-Annexin V/DAPI双染色免疫荧光法检测转染成功的NB4细胞中NLSRARα的表达及定位; FITC-Annexin V/PI双染色激光共聚焦法检测转染成功的NB4细胞中NLSRARα的表达及定位。结果显示, 重组腺病毒Ad-NE和阴性对照腺病毒Ad-KZ对NB4细胞的感染效率可达70%~80%。RT-PCR和Western blot结果显示, 感染了重组腺病毒Ad-NLS-RARα的NB4细胞成功表达NE基因和NE蛋白, 且有NLS-RARα的蛋白表达。用细胞免疫荧光法、激光共聚焦法检测出已感染的NB4细胞中NLS-RARα蛋白的表达, 并推测其主要定位于胞核。综上所述, 该文成功用重组腺病毒Ad-NE感染NB4细胞, 并用Western blot法、免疫荧光法、激光共聚焦法验证了NLSRARα蛋白的存在并推测其定位, 为进一步研究急性早幼粒细胞白血病的早期诊断及复发监测提供了新的思路。

 

关键词  NLS-RARα; 腺病毒; NB4; 急性早幼粒细胞白血病

 
收稿日期: 2013-10-24  接受日期: 2013-12-2
国家自然科学基金(批准号: 81171658)和重庆市自然科学基金计划重点项目(批准号: 2011BA5037)资助的课题
 

*通讯作者。Tel: 023-68485006, E-mail: lbz2753@qq.com

 
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