第36卷 第1期(2014年1月):18-25 DOI:10.11844/cjcb.2014.01.0283

 

兔Oct4启动子驱动RFP基因表达载体的构建及验证

 

唐 澜1 姜伟华2 尹明茹2 周小梅1 李和平1* 陈学进2 李善刚2*

 

(1东北林业大学野生动物资源学院, 哈尔滨 150040; 2上海交通大学医学院实验动物科学部, 上海 200025)

 

摘要  转录因子OCT4在维持和调控胚胎干细胞的多能性中发挥着重要的作用。Oct4基因启动子驱动标志蛋白的表达对研究胚胎干细胞多能性和建立iPS细胞有重要意义。由于GFP在慢病毒转染过程中常用作转染标记, 计划构建兔Oct4基因启动子(rOct4)驱动红色荧光蛋白表达的载体, 这将有利于兔ES细胞和iPS细胞制备的研究。通过PCR方法扩增rOct4, 构建了rOct4驱动RFP基因的表达载体rOct4-RFP。经转染小鼠ES细胞验证正确后, 将rOct4-RFP质粒转染兔成纤维细胞系获得rOct4-RFP成纤维细胞系。经过酶切和测序验证, 证明rOct4-RFP构建成功, 而且能够在小鼠ES细胞系E14中表达细胞红色荧光蛋白, 并受细胞分化状态的调控。通过脂质体介导的基因转移、抗性筛选和PCR鉴定建立了rOct4-RFP转基因成纤维细胞系。

 

关键词  兔; rOct4启动子; RFP; 干细胞; 转基因

 
收稿日期: 2013-9-3  接受日期: 2013-11-4
国家自然科学基金(批准号: 81170756、31101048)和上海市自然科学基金项目(批准号: 11140901600、11ZR1418800)资助的课题
 

*通讯作者。Tel: 0451-82192032, E-mail: 461905800@qq.com; Tel: 021-63846590, E-mail: lis101@163.com

 
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