第35卷 第1期(2013年1月):30-35

 

FOXO3a沉默或过表达对内皮祖细胞增殖的影响

 

黄黎亚 王 飞 曹 青 刘 芳 桑甜甜 陈书艳*

 

(上海交通大学医学院附属新华医院老年医学科, 上海 200092)

 

摘要  观察FOXO3a(forkhead box O3a)沉默或过表达对内皮祖细胞(endothelial progenitor
    cells, EPCs)增殖的影响。构建了沉默型Ad-shRNA-FOXO3a和突变型Ad-TM(triple mutant)-FOXO3a重组腺病毒载体。密度梯度离心法结合荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting, FACS)分离人脐血来源的EPCs(CD133+CD34+), 并进行体外培养及免疫荧光鉴定。将上述重组腺病毒载体转染EPCs并观察转染效率与细胞形态学改变; Western blot分析FOXO3a蛋白表达变化; 细胞计数与MTT法分析FOXO3a沉默或过表达对EPCs增殖的影响。成功构建了Ad-shRNA-FOXO3a、Ad-TM-FOXO3a重组腺病毒载体并转染人脐血来源EPCs。Western blot提示, Ad-shRNA-FOXO3a转染EPCs后明显抑制了FOXO3a蛋白的表达; Ad-TM-FOXO3a转染EPCs后明显增加了FOXO3a蛋白的表达。结合细胞形态学改变、细胞计数与MTT法实验结果提示, 有效沉默FOXO3a明显促进了EPCs增殖; FOXO3a过表达明显抑制了EPCs增殖。人脐血来源的EPCs中, FOXO3a参与了细胞增殖的调节。

 

关键词  FOXO3a; 基因沉默; 基因突变; 腺病毒载体; 内皮祖细胞; 细胞增殖

 
收稿日期: 2012-9-9  接受日期: 2012-10-23
国家自然科学基金(批准号: 30973152)资助的课题
 

*通讯作者。Tel: 021-25078999-7700, E-mail: shuyanchencn@yahoo.com.cn

 
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