第34卷 第7期(2012年7月):685-689

 

荧光定量PCR精确检测人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数方法的建立

 

孙 懿1,2,3 曾思聪1,2,3 胡 亮1,2,3 卢光琇1,2,3 林 戈1,2,3*

 

(1中南大学生殖与干细胞工程研究所, 长沙 410078; 2人类干细胞国家工程研究中心, 长沙 410078; 3卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室, 长沙 410078)

 

摘要  建立一种精确定量人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的方法。构建包含线粒体DNAND1和核单拷贝基因β-globin基因序列的重组质粒作为标准品; 收集无饲养层培养体系下人胚胎干细胞DNA样本, 结合2个单独的Taqman探针实时荧光定量PCR对待测样本中线粒体ND1和核β-globin基因分别进行定量, 从而对人胚胎干细胞线粒体DNA的含量进行了精确定量。结果提示,人胚胎干细胞线粒体DNA的平均拷贝数/细胞为1 321±228。研究表明, 该技术可对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数进行准确的测定, 为研究培养条件对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的影响及优化体外培养条件奠定了基础。

 

关键词  人胚胎干细胞; 线粒体DNA; DNA拷贝数

 
收稿日期: 2012-3-16  接受日期: 2012-4-5
国家自然科学基金(No.81101510)、湖南省自然科学基金青年基金(No.09JJ4009)、国家高技术研究发展计划(863)(No.2006AA02A102)、高等学校博士学科点专项科研基金新教师基金(No.200805331133)和中央高校基本科研业务费青年教师助推基金(No.201012200219)资助项目
 

*通讯作者。Tel: 0731-82355100-8428, E-mail: linggf36@yahoo.com.cn

 
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