第34卷 第2期(2012年2月):135-145

 

利用显性负模型研究整合素β3胞浆段RGT序列对信号转导的调控机制

 

陶岚岚 黄建松 吕媛靖 周玉兰 崔雄鹰 阮 铮 奚晓东*

 

(上海交通大学附属瑞金医院, 上海血液学研究所、医学基因组国家重点实验室, 上海 200025)

 

摘要  该研究探讨整合素β3胞浆段RGT序列在整合素信号转导中的作用。利用IL-2R胞外段和跨膜段(Tac)与整合素β3胞浆段全长或截短序列构建Tac-β3嵌合体, 即Tac-β3和Tac-β3Δ759, 使其分别在表达GPIbIX、整合素αIIbβ3的CHO细胞株(IbIX/IIbIIIa-CHO细胞株)中稳定表达(即IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3、IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3Δ759细胞株)。利用竞争酶联免疫法对Tac-β3嵌合体进行定量, 观察IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3、IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3Δ759细胞株在固相化纤维蛋白原上的伸展情况(代表外向内的信号转导); Co-IP研究Tac-β3嵌合体、β3与下游信号分子Src的结合情况。结果发现: 竞争酶联免疫法证实了两个细胞株的Tac-β3嵌合体表达都高于野生型β3, 保证了Tac-β3嵌合体对内源性β3在结合胞内分子中的显性负效应; IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3细胞株在固相化纤维蛋白原上的黏附伸展能力受到抑制, 而IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3Δ759细胞株在固相化纤维蛋白原上的黏附伸展能力并未受到明显影响。Co-IP结果显示: Tac-β3能结合内源性Src, 而胞浆段RGT序列缺失的Tac-β3Δ759则不与内源性Src结合。选择性地破坏Tac-β3的Src结合能力即足以去除其对外向内信号转导的显性负效应, 从而表明: 整合素β3尾端RGT序列与Src的相互作用在这一信号转导通路中起决定性的作用。

 

关键词  显性负; 整合素αIIbβ3; 竞争酶联免疫测定; 蛋白质相互作用; 信号转导

 
收稿日期: 2011-10-12  接受日期: 2011-12-9
国家高技术研究发展计划(863)(No.2006AA02A245)、国家自然科学基金(No.81070414)和上海市科委国际合作项目(No.09410706800)资助项目
 

*通讯作者。Tel: 021-64370045-610616, E-mail: xi_xiaodong@shsmu.edu.cn

 
您是第 位访问者,欢迎!
主 办:中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国细胞生物学学会
协办: 上海国联干细胞技术有限公司 上海赛傲生物技术有限公司
地 址:上海徐汇区岳阳路319号31号楼A楼303室 邮编:200031 电话:021-54920950 / 2892 / 2895 Email:cjcb@sibs.ac.cn
沪ICP备05017545号