第34卷 第1期(2012年1月):18-24

 

双载体转重链Tyr664Cys和轻链Thr1286Cys突变体BDD-FVIII基因

 

朱甫祥* 杨树德 刘泽隆 缪 静 屈慧鸽 迟晓艳

 

(鲁东大学生命科学学院, 烟台 264025)

 

摘要  用双载体转运凝血VIII因子基因在甲型血友病基因治疗研究中可克服AAV毒载体容量限制, 但存在重链分泌低效和链不均衡性问题。为探索重、轻链间二硫键形成对重链分泌的促进作用, 该文用双载体转B结构域大部缺失型FVIII(BDD-FVIII)的重链和轻链基因, 将重链的Tyr664和轻链Thr1826突变为Cys, 研究了HEK293细胞共转基因后的基因表达、分泌至培养上清的重链量和凝血生物活性。用Western blot检测细胞裂解液结果显示, 非还原条件下有明显的二硫键交联的重、轻链蛋白; 链特异性ELISA定量检测细胞分泌的重链为(125±29) ng/mL, 明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞的(75±23) ng/mL; Coatest法显示细胞分泌的凝血活性为(0.78±0.29) U/mL, 也明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞(0.34±0.12) U/mL。结果表明, 重、轻链间的二硫键形成可提高双载体转FVIII基因的功效, 为进一步在动物体内转基因提供了实验依据。

 

关键词  凝血VIII因子; 双载体; 链间二硫键; 重链分泌

 
收稿日期: 2011-7-26  接受日期: 2011-10-28
山东省自然科学基金(No.ZR2010CM061)、烟台市科技计划项目(No.2008152)和教育部留学回国人员科研启动基金(No.20071108)资助项目
 

*通讯作者。Tel: 0535-6693825, E-mail: fuxiangmail@163.com

 
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