第31卷 第5期(2009年12月):689-693

 

皮层蛋白受磷酸化调控机制的荧光共振能量转移分析

 

朱建伟1,2* 陆毅祥2 马利林1 黄宝玉1 刘培根1 詹 熙2

 

(南通大学附属医院, 1普外科, 2临床医学研究中心, 南通226001)

 

摘要  皮层蛋白(cortactin)是一种癌基因蛋白, 是酪氨酸磷酸化激酶Src的作用底物, 到目前为止, 皮层蛋白受磷酸化调控的机制还不清楚。本研究用荧光共振能量转移(FRET)分析皮层蛋白受磷酸化调控后的蛋白质结构变化, 推测皮层蛋白受磷酸化调控的可能机制。采用蓝绿色荧光蛋白(CFP)和黄色荧光蛋白(YFP)作为配对, 设计和构建基于皮层蛋白羧基端SH3功能的蛋白质传感器, 转染NIH/3T3细胞, 将细胞以过钒酸盐(PV)和PP2处理, 人为诱导或抑制细胞蛋白磷酸化, 比较皮层蛋白的磷酸化和非磷酸化状态FRET的不同; 进一步观察皮层蛋白磷酸化位点突变后FRET的变化, 以此判断皮层蛋白的磷酸化作用后结构的变化。所设计的生物传感器供体和受体工作良好。FRET分析显示, 在PP2处理后, FRET能量变化明显较对照组增高, 但用PV处理后, FRET下降。皮层蛋白的磷酸化位点突变后, 产生的FRET明显较野生型皮层蛋白产生的FRET为弱。因此推测, 皮层蛋白在磷酸化后其分子结构处于“展开”状态, 并可能以此增强和其他细胞蛋白的相互作用。

 

关键词  皮层蛋白; 磷酸化; 蛋白质结构

 
收稿日期: 2009-6-18  接受日期: 2009-8-24
国家自然科学基金(No.30771126)、教育部回国留学人员启动基金(2008-890)及江苏省自然科学基金(No.BK2006058)资助项目
 

*通讯作者。Tel: 0513-81161221, E-mail: usazhujianwei@yahoo.com.cn

 
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