第31卷 第5期(2009年12月):671-676

 

重组激活基因1 shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

 

陈浩浩 周星娟 周 婧 李一乔 韩 曙 凌树才*

 

(浙江大学医学院人体解剖与细胞生物学系, 杭州310058)

 

摘要  构建3对针对大鼠海马神经元重组激活基因(Rag1)的RNA干扰重组表达载体及1对无关序列的载体, 分别命名为shRNA1、shRNA2、 shRNA3及negative。经基因测序确认后, 采用慢病毒载体系统分别包装4个载体, 而后分别感染体外培养的大鼠原代海马神经细胞, 收集感染后96 h的细胞, 通过免疫荧光观察细胞感染情况, 并且利用RT-PCR和Western印迹检测Rag1 mRNA及蛋白质的表达。经测序鉴定合成的shRNA序列正确, 并且慢病毒感染细胞效果良好。LV-shRNA1组、LV-shRNA2组、LV-shRNA3组与正常对照组相比, Rag1 mRNA表达都明显减少(P<0.01), 其中LV-shRNA3组的抑制效率最高为(76.4±3.5)%, Western印迹结果与其基本一致, 而LV-negative组对Rag1 mRNA及其表达的蛋白质都无明显影响。实验结果表明, 我们成功构建了能特异性抑制大鼠海马神经元Rag1表达的shRNA慢病毒表达载体。

 

关键词  重组激活基因1; 神经元; shRNA; RT-PCR; Western印迹

 
收稿日期: 2009-4-2  接受日期: 2009-9-4
国家自然科学基金资助项目(No.30570586)
 

*通讯作者。Tel: 0571-88208165, E-mail: lingshucai@zju.edu.cn

 
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